Цитометр: что это, принцип работы, основные виды, сфера использования



В данной статье мы узнаем, что такое цитометр, в чем принцип его работы, какие основные виды существуют и в каких сферах используется. Расскажем, чем отличаются лазеры, как определить длину волны по цвету. Посмотрим, как изобретение метода и оборудования для него повлияло на развитие таких наук, как медицина, цитология, гематология и даже сферы сельского хозяйства.

Что это такое цитометр?

Цитометр – это прибор, при помощи которого проводят анализ клеток, которые находятся в потоке жидкости, что такое титратор его особенности и применение, мы уже обсуждали. Данный способ исследования еще называют проточным. В данном случае есть возможность исследовать каждую частицу в отдельности, даже если их десятки тысяч. Цитометр значительно сокращает время на работу, кроме этого он один из самых достоверных и точных. Первый инструмент для проточного анализа появился в середине 20 века в Германии. Открытие было сразу запатентовано, а уже через год было организованно его серийное производство. Свое современное название метод получил лишь через десять лет.

Данный метод прочно занял лидирующие позиции при изучении дисперсных сред в режиме поштучного анализа элементов этой среды. Основная информация поступает при помощи сигналов фоторассеивания и флуоресценции. Положение клеток отличается тем, что они находятся в потоке. Образцы загружаются в форсунку, диаметр которой около 100 мкм, из нее выходят одиночные клетки, это еще называют системой гидрофокусировки. На выходе одиночная клетка облучается, при этом сигналы фоторассеивания и флуоресценции регистрируются на компьютере, происходит это по каждой клетке в отдельности.

Анализ отличается высокой скоростью, примерно до 100 000 тысяч событий за одну секунду, позволяет работать с большим количеством клеток, все это является его несомненным преимуществом. С его помощью можно определить субпопуляции клеток. Измерение флуоресценции происходит объективно, раньше с помощью только одних банок для реактивов из темного стекла, это было недостижимо.

Принцип работы

Принцип работы цитометра заключается в гидрофокусировании системы, когда проба образец или проба проходит между струями, обе, кстати, являются внешними. Такая клеточная суспензия, которую предварительно измельчили при помощи моноканальных антител или флуоресцентными красителями, попадает в проток, проходящий через проточную ячейку. Для того чтобы клетки выстроились друг за другом создаются специальные условия. Для этого используют гиподинамическое фокусирование струи.

Клетки проходят через лазер, в момент пересечения происходит фиксация нескольких параметров. В первую очередь, это рассеяние света под малыми углами, не более 10 градусов. Следующий показатель, который фиксируется – рассеяние под углом 90 градусов. Также происходит измерение флуоресцентности, сразу по нескольким каналам. Последние показатели зависят от специфической флуоресценции и автофлуоресценции. Все это связано с такими компонентами. Как рецепторы, клетки ДНК, внутриклеточные белки.

Проточный цитометр подключается к компьютеру, в нем вся информация переводится в цифры, данные можно заносить в лабораторные документы их виды и хранение, мы уже обсуждали. Данный метод – один из самых функциональных для аналитики различных популяций клеток. Причем, данные по их огромному количеству получаются не усредненные, а конкретными, по каждой клетке в отдельности. Цитометрия позволяет изучать кровь, ее отдельные фракции, даже отдельные популяции лимфоцитов.

Основные виды

Основные виды цитометров могут отличаться по комплектации, так, может быть несколько видов ячеек, одни из них отличаются возможностью гидродинамической фокусировки, в данном случае ламинарный поток плотно обжимает образец. Есть ячейки, которые создают поток по принципу микрофлюидки, такое взаимодействие называется капиллярным. В оборудовании могут использоваться и разные типы лазеров. Основное их отличие – длина волны, они будет отличаться по цвету, так у голубого длина составит 488 нм, красного – 642нм, а фиолетовый – 406 нм. Чаще всего используют именно голубые лазеры, поэтому их еще называют универсальными.

В приборах количество и комплектация лазеров может меняться. От выбранного цвета будет зависеть цвет красителя, т.е. флуорохромы. Для создания коллинеарной системы цвет всех лазеров собирают в один. На цитометрах могут стоять разные детекторы. Так, для усиления сигнала применяют вакуумную лампу с электродами. На него попадает свет после облучения клеток, после чего происходит выбивание электронов, которые передвигаются в сторону промежуточных электродов, выбивая их них еще.

В работе цитометра участвуют и фотоны, которые способны преобразовывать электроимпульс. Его величина пропорциональна свету, который попадает на детектор. Сигнал становится сильнее в том случае, когда есть сильная флуоресценция, которая достигается наличием в клетке большого количества окрашенных структур.

Сфера использования цитометра

Сфера использования цитометра не ограничивается только химией, данные прибор используют в фармакологии, как и лабораторные химические реакторы что это такое и про их предназначение, мы уже говорили. Он применяется для определения активности ферментов, он позволяет понять, на какой стадии цикла находится клетка и даже обозначить экспрессию маркеров. Без цитометра сложно представить и развитие иммунологии, которая позволяет обнаружить внутриклеточные белки, оценить клеточный цикл и фагоцитарную активность. В гематологии цитометр используется для определения заболеваний крови, в том числе лейкозов.

Сельское хозяйство при помощи данного метода проводит анализ протопластов, плоидности, изучает животный биоматериал. И, кончено, ни обходятся без цитометра лаборатории, которые занимаются изучением клеток. С его помощью определяют экспрессию поверхностных антигенов, изучают стадии клеточного цикла и проводят измерения физиологических параметров клетки.

Есть вопросы?Укажите номер телефона и мы вам перезвоним.
Другие городаВ которые мы доставляем продукцию.

Купить продукцию
Поля отмеченные * обязательны для заполнения